谁有组织切片的制作过程 苏木素伊红染色

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一、【单选题】组织切片苏木素 - 伊红染色 (HE 染色 ) 细胞核的染色原理正确的是 (5.0分)

二、谁有组织切片的制作过程

一、【单选题】组织切片苏木素 - 伊红染色 (HE 染色 ) 细胞核的染色原理正确的是 (5.0分)

细胞核带负电，呈酸性，易与阳性苏木精碱性染料结合而显色。

二、谁有组织切片的制作过程

一、制备显微标本的切片方法-石蜡包埋切片方法这是最常用的切片方法。石蜡作为组织的填充支撑介质，将整个组织包埋，最终凝固成均匀的固体结构。使用切片机制，以采取极薄的切片。为了让石蜡渗入组织，有必要使组织脱水。其过程大致如下：(1)固定：当生物标本脱离生物体或培养环境时，细胞会自溶分解。因此，有必要用固定剂处理蛋白质以阻止死亡或死后的变化。所有永久保存的标本都需要固定。常用的固定剂有甲醛、乙醇等。可以凝固蛋白质。也有由几种试剂制成的固定液，如卡诺伊固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸制成。固色力更快更强，不含水，可以避免糖原等水溶性物质在固色过程中的损失。脱水：是除去组织和细胞中所含的水分。通常使用酒精，浓度逐渐增加到100%。这个过程也进一步硬化了组织块。透明性：是用一种既能溶解纯酒精又能溶解石蜡的有机溶剂来代替组织中的酒精，使石蜡得以浸没。二甲苯通常用作透明剂。(4)浸蜡：在培养箱中进行。将透明组织块放入加热熔化的石蜡中，石蜡浸泡在组织中作为支持介质。包埋：将浸过蜡的组织块放入热熔包埋石蜡中，快速冷凝，组织一定会被蜡包埋。[6]切片：使用切片器。常用的切片机有旋转式和平推式。用旋转的方式很容易切出连续的切片。切片厚度根据生产目的进行调整。教学标本厚度多为5 ~ 6 m(7)贴片干燥：石蜡切片在温水中展平后，移至载玻片上干燥，即可用于染色。染色后用胶和坡盖密封，可永久保存。二、冷冻切片法是通过低温冷冻硬化组织来满足切片的要求。冷冻切片法需要冷冻切片机，或者在普通切片上准备冷藏设施。恒冷切片机是一种先进的冷冻切片设备。它有一个恒温箱，其中安装了样品冷却台和切片机。恒温箱的功能类似于冰箱，可以在一定范围内调节温度。其结构有利于保持箱内恒定的低温，减少开门时环境温度的干扰。切片机的旋转手柄安装在盒外，便于切片操作。冰冻切片法的优点是处理得当可以最大限度地保持组织的新鲜状态。另外，由于在脱水、透明、浸蜡等过程中不需要有机溶剂处理。以及湿箱中蜡浸渍热的影响，它甚至可以被固定。因此，组织细胞的各种成分和酶的活性可以得到很好的保存，所以这种切片方法常用于酶的组织化学研究。二、苏木精伊红染色(HE染色)是显示标本结构成分最常用的染色方法。这种方法应用于各种组织的染色，是组织学技术的基本方法。可用于任何液体固定的组织和各种包埋切片，但不同包埋切片的处理略有不同。下面简单介绍一下石蜡包埋切片的HE染色方法。1、脱蜡：石蜡切片的组织中充满了石蜡，不能对水溶性染料溶液进行染色，所以染色前必须用二甲苯去除两次石蜡。2、降入水中：将脱蜡后的标本浸入无水酒精和各级酒精中，使组织逐渐接近水。3、用蒸馏水稍微冲洗。苏木精溶液染色约5-15分钟：用自来水洗掉多余的染料。6、放入稀盐酸酒精溶液中进行颜色分离，颜色分离的同时进行镜检，直至细胞核呈红紫色，细胞质无色。7、彩色后

12、上升脱水：染色切片因组织中有水而不透明，不能清晰观察其精细结构。所以组织中的水必须逐渐被各级酒精取代无水酒精，最后进入无水透明剂。13、透明度：分两次加入二甲苯透明剂(每次几分钟)。14、取出切片：擦去纸巾周围多余的二甲苯，滴完胶后加盖玻片密封。结果：细胞核呈蓝紫色，细胞质、胶原纤维和肌纤维呈粉红色，嗜酸性颗粒呈鲜红色，弹性纤维呈鲜粉红色。组织化学和细胞化学染色组织化学和细胞化学是将物理和化学技术应用于组织样品，用显微镜和化学分析方法研究组织和细胞中的化学成分，观察组织和细胞中化学成分的位置、含量和变化规律。这些化学成分通过化学反应产生的不溶性有色物质显示出来。对于某些化学成分，如铁糖原、核酸等。直接或间接的化学反应可以用来产生有色沉淀，以显示它们的位置和相对含量。对于酶来说，要显示其活性，必须要有酶的底物(酶作用的物质)，这个底物是通过酶对底物的分解直接或间接显示出来的。任何通过在光学显微镜下观察细胞而原位显示的化学物质称为组织化学，如果使用电子显微镜观察细胞原位化学成分的染色部分，则称为电子显微镜细胞化学。下面从原理方面简单介绍几种常用的组织化学染色技术1、展示琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的Nitro -BT法：(琥珀酸脱氢酶)(1)酶的定位及生物学意义：琥珀酸脱氢酶是一种线粒体标志酶，其酶不需要辅酶，但有FP，黄素蛋白(FP)作为辅助基团。它常用于组织化学反应，以反映三羧酸的循环。催化过程如下：弱-单甲基(紫红色)HOOC-CH2-CH2-cooh ph2四唑(甲基)(有色)强-二甲基(深紫蓝色)(琥珀酸)(黄素蛋白)HOOC-CH=CH=cooh ph2四唑(无色)(富马酸)原理：上述反应的最后一步。孵育液的制备：0.2M磷酸盐缓冲液(PH7.6)10ml溶液A与0.2M琥珀酸钠(S01 .琥珀酸盐)10ml备用溶液B: 2 mg硝基四氮唑(Nitro-BR)2ml 0.2M磷酸盐缓冲液(PH7.6) 2ml孵育液A: 2 ml溶液B:聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。(2)滴染法：将冰冻切片的盖玻片(标本面朝上)置于预热的培养皿(底部有湿滤纸)中，滴加孵育液，直至覆盖所有组织，在37培养箱中孵育45-60分钟(肝脏和心肌组织15分钟即可)。(3)用生理盐水冲洗两次(轻轻摇晃，防止脱落)。10%福尔马林生理盐水固定10分钟。用15%的酒精浸泡5分钟(两次)。甘油明胶密封片。结果：酶活性强的地方出现蓝色颗粒(二甲基沉淀)，酶活性低的地方形成紫色单甲基。光镜下，酶的活性分布在肝小叶内，有明显的分带现象，外周带强于中央带。在心肌细胞纵切面上，酶活性颗粒沿心肌细胞长轴排列整齐，相邻心肌细胞之间的间隙为闰盘。2、展示葡萄糖-6-磷酸酶(G-6酶)的铅法酶的定位及其生物学意义：酶主要位于内质网中，是内质网的标志酶。G-6酶参与葡萄糖代谢，能水解葡萄糖-6-磷酸释放葡萄糖和磷酸。

原理：G-6酶水解底物(葡萄糖-6-磷酸钾)生成磷酸根离子，被孵育液中的硝酸铅捕获，最终反应物为颗粒状硫化铅沉淀，反应式如下：酶Pb(NO3)2葡萄糖-6-磷酸钾H2O葡萄糖磷酸(NH4) 2SPb2 (PO4) 2Pb2(棕色)。光镜下，G-6酶活性颗粒均匀分布在细胞质中。3、说明了碱性磷酸酶(APL)的定位及其生物学意义：ALP能在碱性环境中催化多种醇和酚的磷酸酯水解，参与磷酸的跨膜转运，具有磷酸转移的功能，因此在细胞膜转运中表现活跃，如毛细血管内皮细胞、肾近曲小管刷状缘、肠皮纹缘等。原理：ALP分解磷酸底物(如-甘油磷酸)生成磷酸根离子，磷酸根离子被孵育液中的氯化钙捕获生成磷酸钙沉淀。但这种沉淀是非金属盐，需要加入硝酸钴生成磷酸钴沉淀。因为无色，需要用硫化铵处理，形成棕黑色硫化钴沉淀，显示出来。它在pH 9.2-9.4的环境中显示最大活性。反应式如下：钙离子Ca2(PO4)2co(NO3)2(NH4)2s CO2(PO4)2cos(无色)(棕黑色)结果：酶的活性部位为棕黑色cos沉淀。4、示核酸的甲基绿-派若宁染色：(1)原理：甲基绿和派若宁都是碱性染料，可以分别对两种核酸(DNA和RNA)进行染色。其机制可能是两个核酸分子都是多聚体，但聚合度不同。甲基绿有两个带电荷的氨基，而派若宁只有一个。因此，在混合染料溶液中，两者竞争的结果是甲基绿容易与高聚合度的DNA结合呈现蓝绿色，而派特宁与低聚合度的RNA结合呈现红色。(试剂制备及方法详见组织学与技术专著)(3)结果：细胞核内DNA呈蓝绿色，核仁及细胞质内RNA呈粉红色。5、显示糖原的高碘酸希夫反应：(1)原理：糖原是一种动物多糖，无色，富含于肝细胞和肌细胞的细胞质中。PAS(高碘酸希夫反应)能在糖原部位产生紫红色物质，从而将其展示出来。RAS反应分为两步：首先强氧化剂高碘酸(分子式：HIO4)打开糖原中葡萄糖分子的C-C键，氧化CHOH-CHOH生成双醛基，然后希夫试剂中无色的亚硫酸品红分子与糖的醛基结合生成新的紫红色复合物。HIO4schiff试剂多糖醛基紫红色反应产物(氧化)(试剂制备及方法见组织学技术专论)结果：糖原为紫红色颗粒。

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