常用的蛋白质含量测定方法有哪些 蛋白质的含量测定方法

网上有很多关于常用的蛋白质含量测定方法有哪些的知识，也有很多人为大家解答关于蛋白质的含量测定方法的问题，今天小编为大家整理了关于这方面的知识，让我们一起来看下吧!

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一、叙述生物样品中蛋白质含量测定方法有哪些

二、常用的蛋白质含量测定方法有哪些

三、蛋白质浓度测定方法有哪些？

一、叙述生物样品中蛋白质含量测定方法有哪些

蛋白质含量的测定方法有凯氏定氮法、缩二脲法、酚试剂法(劳里法)、布拉德福法、紫外吸收法、BCA法和杜马斯燃烧法。其中，BCA法和布拉德福德法已成为实验室中最常用的两种蛋白质浓度定量检测方法。

BCA法通常用现成的试剂盒完成，操作简单、稳定。以下是后白山BCA蛋白定量试剂盒：

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二、常用的蛋白质含量测定方法有哪些

凯氏定氮法原理：蛋白质中平均含氮量为16%。当样品用浓硫酸加热时，蛋白质氮转化为铵盐。在强碱性条件下，氨被蒸发，用带指示剂的硼酸吸收。最后用标准酸滴定硼酸，通过标准酸的量可以计算出蛋白质中的氮含量和蛋白质含量。缩二脲法原理：尿素在180脱氨基形成缩二脲，在碱性溶液中能与Cu2形成稳定的紫红色络合物。蛋白质中的肽键实际上是一个酰胺键，所以肽、蛋白质等。都有缩二脲反应生成蓝色或紫色的络合物。蛋白质含量的比色测定。缺点：灵敏度低，样品必须是可溶的，在含有大量糖和脯氨酸的多肽中颜色不好。其准确度差(几毫克)，会受到样品中硫酸铵和Tris的干扰，但准确度高，不受蛋白质种类的影响。(3)福林酚法(Lowry)福林酚法是缩二脲法的延伸，所用试剂由试剂A和试剂B组成.试剂A相当于缩二脲试剂(碱性铜试剂)，试剂B含有磷钼酸和磷钨酸。在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基可将Cu2还原为Cu，Cu可与福林-酚试剂定量反应生成蓝色物质。蛋白质含量用600nm比色法测定。灵敏度高(约0.1 mg)，但麻烦，还会受到硫酸铵和硫醇化合物的干扰。步骤中要特别注意试剂混合的均匀彻底，否则会出现较大误差。280nm处紫外吸收：Tyr在280nm处吸收，进行测定。280nm-260nm吸收差法：若样品溶液中有少量核酸共存，则按下式计算：蛋白质浓度(mg/ml)=1.24E280-0.74E260(以280260为角标)色素结合法(Bradford法)直接测定法：利用蛋白质与色素分子的结合物(考马斯亮蓝G-250)。蛋白质通过考马斯亮蓝(CBG)染色来确定。CBG有点像指示剂，在不同的pH值下会变色。酸性时呈棕色，中性时呈蓝色。当CBG与蛋白质相连时，它会变成蓝色，因为蛋白质会给CBG提供一个更中性的环境。样品中的蛋白质越多，吸收到蛋白质中的CBG就越多，蓝色就会增强。因此，蓝色的颜色强度与样品中蛋白质的质量成正比。间接测定法：蛋白质与某些酸性或碱性色素分子结合，形成不溶性盐沉淀。未结合的色素用分光光度计测定，蛋白质的含量用每克样品中结合的色素的量来表示。BCA法BCA (4，4’-二羧基-2，2’-二喹啉)法与Lowry法相似，主要区别是在碱性溶液中，蛋白质将Cu2转化为Cu后，BCA代替福林试剂与Cu结合生成深紫色，在波长562 nm处有强吸收。其优点是BCA在碱性溶液中比福林试剂更稳定，因此BCA与碱性铜离子溶液结合的显色反应只需一步即可完成。灵敏度洛瑞法是类似的。这种方法对阴离子、非离子、两性离子洗涤剂和尿素的耐受性较强，干扰较少，但会受到还原糖和EDTA的干扰。胶体金是氯金酸的水溶胶，颜色为品红色，电子密度高，可与多种生物大分子结合。胶体金是一种疏水性胶体，带负电荷，遇到蛋白质会变成蓝色。颜色的变化与蛋白质有定量关系，因此可用于蛋白质的定量测定。其他方法有些蛋白质含有特殊的非蛋白基团，如过氧化物酶含有血红素基团，可通过测量403 nm波长处的吸收来定量。含有特殊金属(如镉)的酶可以追踪金属。

三、蛋白质浓度测定方法有哪些？

目前常用的古代经典方法有四种，即定氮法、缩二脲法、福林-酚试剂法(劳里法)和紫外吸收法。此外，还有一种新的测定方法是近十年来广泛使用的，即Bradford法；还有最近广泛使用的蛋白质定量方法——BCA法。其中Bradford法和Lowry法较敏感，比紫外吸收法敏感10 ~ 20倍，比双缩脲法敏感100多倍。定氮法虽然更复杂，但更准确，定氮法测定的蛋白质常作为其他方法的标准蛋白质。

以上就是关于常用的蛋白质含量测定方法有哪些的知识，后面我们会继续为大家整理关于蛋白质的含量测定方法的知识，希望能够帮助到大家！