如何构建稳定细胞株？ 嘌呤霉素筛选浓度经验总结

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一、如何构建稳定细胞株？

一、如何构建稳定细胞株？

构建方法：质粒整合到染色体后，用相应质粒DNA中的抗性标记筛选细胞系，获得稳定表达的细胞系。

细胞株是通过单细胞分离培养或筛选，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞系的特殊性质或标记必须在整个培养期间一直存在。原代培养第一次成功传代后，就是一个细胞系，由原代培养中原本存在的细胞谱系组成。

如果不能继续传代或传代次数有限，可称为有限细胞系，如果能继续培养，则称为连续细胞系，可培养50代以上，无限期培养。

细胞系是通过选择或克隆形成从原代培养物或细胞系获得的具有特殊性质或标记的培养细胞。从栽培代数来说，可以栽培到40-50代。细胞系的特殊性质或标记必须在整个培养期间一直存在。对于人肿瘤细胞，体外培养半年以上，生长稳定，连续传代的可称为连续株或系。扩展数据：一般过程

1、筛选浓度的确定：以10-14天所有细胞死亡的抗生素浓度作为筛选浓度；2、细胞接种：转染实验前一天接种细胞，各种细胞的平板密度取决于各种细胞的生长速度和细胞形态。转染当天细胞密度应达到60%~80%覆盖率；3、细胞转染(病毒、脂质体、电穿孔、fu gene 6)；4、通过质粒中包含的抗性选择进行筛选；5、识别和筛查结果。百度百科-稳定细胞系

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