sec有什么实际运用？ 甲叉双丙烯酰胺是致癌物质吗

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一、sec有什么实际运用？

一、sec有什么实际运用？

近年来，尺寸排阻色谱(SEC)被广泛应用于各个行业，是研究分子量和分子量分布、研究聚合物分子结构、揭示聚合物样品物理性质的重要手段。它对聚合物产品的质量控制和合成工艺的改进起到了积极的作用。

尺寸排阻色谱的定义

尺寸排阻色谱(SEC)是一种根据样品分子大小进行分离的色谱技术。又称凝胶色谱、分子排阻色谱、尺寸排阻色谱等，是液相色谱的一种。

尺寸排阻色谱的分类

1、凝胶过滤色谱-GFC

一般用于分离水溶性大分子，凝胶以葡萄糖系列为代表，洗脱溶剂主要是水。

凝胶渗透色谱-GPC

主要用于分析和分离有机溶剂中可溶性聚合物的相对分子量分布。常用的凝胶是交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂是四氢呋喃等有机溶剂。

SEC的基本原理

凝胶本身具有三维网络结构，大分子通过这种网络结构上的孔隙时被排除，小分子通过时被保留。不同分子量的各种组分通过凝胶床时按分子量“排队”，凝胶呈现分子筛效应。

排阻色谱法不适用。

1、分子直径大于最大孔径的所有分子都被排除在凝胶颗粒之外，这被称为完全排除。两个或多个这样的分子不能达到分离效果。

2、直径小于最小孔径的分子都可以进入凝胶颗粒，因此两个或两个以上的分子无法达到分离效果。

两种排阻色谱比较

凝胶渗透色谱法

凝胶过滤色谱法(GFC)

流动相

使用水溶液或缓冲液作为流动相

有机溶剂用作流动相。

常用分析物质

分析聚合物的摩尔质量，如聚乙烯和聚氯乙烯。

多肽、蛋白质、核酸、多糖等。

常用凝胶

交联聚苯乙烯凝胶

葡萄糖系列

优势

操作简单，样品体积小，重现性好，自动化程度高。

条件温和，产品回收率接近100%，回收操作容易实施，产品纯度提高，分析速度快，准确度高，分离机理简单，操作参数少。

劣势

脆而易碎，柱填充不紧密，柱效低。

选择性低，料液处理量小，洗脱产物被稀释。

固定相和流动相

流动相的选择

1、必须能够溶解样品，这与凝胶本身非常相似，以便润湿凝胶。

溶剂的粘度应该小，因为高粘度的溶剂限制了分子扩散。

常用的流动相是四氢呋喃、甲苯、氯仿、二甲胺和水。

固定相(凝胶)

具有三维网络结构的交联聚合物含有大量的液体(通常是水)，这种液体柔软且有弹性。

分类：

1、按其机械强度可分为软凝胶、半硬凝胶和硬凝胶。

2、按化学性质分为有机凝胶(均质凝胶、半均质凝胶、非均质凝胶)；无机凝胶(异质凝胶)。

凝胶过滤介质

常用的有葡聚糖、聚丙烯酰胺、琼脂糖和亲脂性凝胶。

1、葡聚糖凝胶

葡聚糖凝胶是一种常见的凝胶，是葡聚糖和甘油通过醚桥交联形成的多孔网络结构。

由于分子中含有大量的羟基，具有极性，在水和乙二醇、二甲基亚砜等其他极性溶剂中溶胀成凝胶颗粒，由于醚键的不活泼性，具有很高的稳定性。

交联度大的孔小，吸液膨胀小，可用于小分子物质的分离。交联度小的孔大，吸液膨胀也大，适合大分子物质的分离。

2、聚丙烯酰胺凝胶

聚丙烯酰胺凝胶是一种合成凝胶，由丙烯酰胺单元中的亚甲基双丙烯酰胺交联，干燥，

琼脂糖凝胶依靠糖链之间的次级链，如氢键，来维持网络结构。一般来说，它的结构是稳定的，并且它可以在许多条件下使用(例如水、pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40以上开始融化，不能用高压灭菌，可以用化学灭菌法处理。其优点是分子量适用范围广。

4、亲脂性凝胶

亲脂性凝胶用于一些不溶于水或具有一定亲脂性的样品。

(1)聚苯乙烯凝胶：用途广泛，由苯乙烯和二乙烯苯聚合而成。它具有良好的机械性能和较宽的孔径分布，广泛应用于合成高分子材料的分离和分析。

(2)葡聚糖凝胶LH-20:葡聚糖凝胶G-25的分子中引入羟丙基取代羟基的氢，处于醚键状态，因此具有一定的亲油性，适用于分离黄酮类、色素等有机物。

(3)无机凝胶：无机凝胶分为多孔硅胶和多孔玻璃，机械性能好，选择性高。然而，由于其高吸附性，应注意极性样品的处理。

凝胶特征参数

(1)排除限制：

指不能扩散到凝胶网络中的最小分子的相对分子质量。

(2)分类范围：

也就是说，可以获得能够凝胶阻滞并彼此分离的溶质的相对分子质量范围。

(3)膨胀率：

一些市售的干凝胶颗粒(如Sephadex G系列)在使用前要用水溶液溶胀，溶胀后每克干凝胶所吸收的水的百分比称为溶胀率，即，

(4)凝胶粒度：

一般为球形，其粒径对分辨率有重要影响。粒径越小，分离效率越高。软凝胶的粒径比较大，一般为50 ~ 150 um，硬凝胶的粒径比较小，一般为5 ~ 50 um。

(5)床体积

即1g干凝胶溶胀后所占的体积。

(6)空隙体积

指色谱柱中凝胶之间的孔隙体积，即V0值。孔隙体积可以由相对分子质量大于排阻极限的溶质来确定。

凝胶的选择

好的凝胶过滤介质应满足以下要求：

(1)高亲水性和惰性表面，即介质和溶质之间没有化学或物理相互作用；

(2)稳定性强，在较宽的pH值、离子强度和化学试剂范围内稳定，使用寿命长；

(3)具有一定的孔径分布范围；

(4)高机械强度，允许更高的操作压力。

影响分离特性的因素

1、填料

分离度与蛋白质分离范围和最小分子量的比值是选择填料时要考虑的首要问题。

2、列长度

排阻色谱的分辨率与柱长的平方根成正比。一般来说，60-120cm的柱长是分离蛋白质的理想选择，而30cm的柱多用于快速分离。

3、速度

流量是影响分离的重要因素。一般流量低，分离效果好。如果流速小于0.1ml/min，蛋白质的分离度较好；当浓度为0.5-1.0毫升/分钟时，直径为7.5毫米的柱分离效率较高。

4、样品容量

样品体积和样品浓度会明显影响分辨率。浓度高，体积小，有利于分离。蛋白质样品的适宜浓度范围一般为0.01-0.5%，样品体积为柱体积的1-3%。

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